Question

CTAB法提取DNA，有大量絮状沉淀，电泳DNA带弱，点样孔不亮，不是蛋白，会是多糖吗？怎么办

Answer 1

（1）尽可能采用新鲜无损伤的幼叶，在与提取缓冲液接触前，应防止冰冻的样品在空气中融化，否则酚类易被氧化。同时采用液氮研磨，尽可能磨细、磨匀，且时间不能太长。（2）在加裂解液前，先加入冷冻的提取缓冲液（内含3%的 PVP 及 2%β-巯基乙醇），可除去部分杂质和多糖，且 PVP 可以和多酚类物质结合形成复合物，防止多酚物质氧化成醌类，同时 PVP 能有效去除多糖，从而降低酚类物质以及多糖对 DNA 的影响。（3）适当提高提取缓冲液中SDS（2.5％）的浓度，使 SDS 与糖充分结合，通过高速离心除去。

追问

忘记说了，我提取的是丝状真菌DNA，测了浓度A260/280 基本都是1.8几，这个值应该还可以，可是A260/230都是0.3左右，说明有大量的杂质，我最为怀疑是多糖

追答

恩，A260/230小于2.0就表明溶液中有盐和小分子杂质。

Answer 2

可能你提取不纯了。再次提纯吧。

追问

用什么提纯啊，我又用氯仿/异戊醇提了2次，还是一样没有什么变化

追答

你的操作有没有规范准确，或者提纯的时候有没有污染了？你可以加些量提纯试试。