Question

请问，GAPDH作为RT-PCR内参的原理是什么呀？我知道为什用它做内参了，就是不清楚怎么用它，谢谢啦！

Answer 1

因为GAPDH的基因表达量在是不同状态下是变化很小的，所以可以认为GAPDH表达是恒定的，所以可以选择它来做内参。
拓展资料：
GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ）的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个酶，广泛分布于各种组织中的细胞。
该酶是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。该酶基因为管家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。常用的内参有，ACTB（β-actin、β-肌动蛋白）、GAPDH或18S等。目的是在于避免RNA定量误差、加样误差以及各PCR反应体系中扩增效率不均一、各孔间的温差等所造成的误差、这些都是管家基因，在各个组织中的表达量相对稳定，其中18S同整个基因谱有关（负责装配），它在总RNA中占的比例最高。
【GAPDH的作用】广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参，即将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。
【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ）的英文缩写。GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。
【Western Blot】蛋白质印迹法（免疫印迹试验）。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

Answer 2

一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大，所以可以认为它们表达是恒定的，故而用来做内参
简而言之，就是你有两个样品（譬如不同生长条件或者不同组织的），要比较其中某基因A表达转录变化，就分别比较两个样品中A相对于GAPDH的表达即可。譬如，如果第一个条件下A：GAPDH=2，在第二个条件下为4，那么在第二个条件下A基因的转录提高了一倍

追问

那怎么定量呢？两个样品的质量即使都取10微克也是存在误差的，即GAPDH的表达存在误差，这种情况下如何得到准确的转录表达信息?