Question

试述凯氏定氮法测定粗蛋白质的原理、方法及注意事项。试说明该方法存在的不足，并对该方法提出改进方法。

Answer 1

1 试剂的配制
粗蛋白测定中所用的化学药品如浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、硼酸、硫酸铜、硫酸钾(硫酸钠)、硫酸铵、蔗糖等均为化学纯，标定盐酸标准溶液用的无水碳酸钠为基准试剂。在配制试剂前一定要用PH试纸或酸度计检测一下蒸馏水是否为中性，所用的烧杯、试剂瓶等配液设备清洗干净。
1.1 盐酸标准溶液的配制
配制的盐酸标准溶液尽量为低浓度，一般C(HCl)=0.02～0.05mol·L-1。低浓度虽然用量大，但可减少操作误差和读数误差。
配制盐酸标准溶液一定要严格按照标准操作进行，基准无水碳酸钠已定于270～300℃灼烧至恒重，称准至0.0001g，做4～6个平行样，去掉最高值和最低值后取平均值，同时还要做空白试验。
盐酸标准溶液的配制量尽量不要太多、使用时间太长，防止水分蒸发和盐酸挥发而影响其浓度的准确性。
1.2 其他试剂的配制
400g·L-1氢氧化钠溶液、20g·L-1硼酸溶液、混合指示剂(1g·L-1甲基红乙醇溶液与5g·L-1溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合)等主要是在称量时要

Answer 2

原理是:蛋白质由氨基酸组成，氨基酸含氮，且含量较高，平均在16％左右，故通过测得氮元素的质量就可以粗略算出蛋白的含量，即m（N）/16％即为蛋白含量。一般将蛋白中的氮转化为氨气，测的氨气的量即可。不足很明显了，太粗略，不准确。比如三聚氰胺就是钻了凯氏定氮法的空子。改进的话，改用其他方法，现在谁还用这方法？考马斯亮蓝法就可以，Folin酚法也行。