Question

活细胞培养液能否漂浮在水中

Answer 1

细胞活力鉴定的方法： 1、相差显微镜观察法 2、FDA染色法 3、伊凡蓝染色法 FDA染色法：是测定原生质体活性的一种方法，即荧光素双醋酸酯染色，FDA本身无荧光，进入原生质体后便产生荧光素，它不能自由进入原生质体膜，因此有活力的细胞便产生荧光。 原生质分离，酶，纤维素酶，离析酶。步骤：叶片表面消毒→去除表皮→叶碎片漂浮在含有酶和渗透压稳定剂的溶液中→培育→原生质体沉到培养皿底部→除去酶溶液→将原生质体移入CPW清洗→离心→清洗基质两次 →重悬浮于培养基→除去小的个体，用血球计计数→调整到合适的密度重悬浮于培养基。 原生质体的培养：培养基，MS+NAA 2.0ppm+BA 0.5ppm+3%蔗糖+9%甘露醇 注意： 1、原生质体分离后，非常脆弱，需要渗透压保护剂的保护直到细胞壁形成。 2、针对不同的研究对象，培养基中生长素和细胞分裂素的水平要做适当调整。 影响原生质体培养的因素，营养需求（NH4+不能过多）渗压剂，培养密度（105/mL）贮藏条件（通常在黑暗处）。 培养方法:液体基质培养法,半液体基质培养法,固体基质培养法,看护培养。 固体培养的步骤,原生质体移入培养基→1体积含原生质体的培养基与1体积含琼脂糖 (40℃)的培养基混和→倒转培养皿在25℃下培养→原生质体重新产生细胞壁并分裂成细 胞团→细胞团于琼脂糖基质中传代培养,培养基中应减少渗压剂以利于愈伤组织的形成→诱导分化成植物的根茎。 原生质体分离培养的意义： 1、除去了细胞壁为植物细胞之间的融合扫平了障碍，同时叶为制造新杂种开辟了道路。 2、原生质体可摄入外源DNA,细胞器、细菌或病毒颗粒，这些特性与植物全能性相结合为高等植物的遗传饰变打下基础。 3、获得细胞无性系和选育突变体的优良起始材料。 取洗涤过的原生质体悬浮液 0.5ml置于10×100mm的小试管中，加入 FDA溶液使其最终浓度为 0.01混匀、置于室温5min后用荧光显微镜观察。激发光滤光片用QB24压制滤光片用JB8。发绿色荧光的原生质体为有活力的，不产生荣光的为无活力的。由于叶绿素的关系，叶肉原生质发黄绿色荧光的为有活力的，发红色荧光的为无活力的。