Question

我想问一下从PCR开始有带胶回收双酶切，载体双酶切，胶回收后怎么把载体和酶切后的基因连在一起

具体的步骤，谢谢

Answer 1

我们用天根公司的胶回收试剂盒，回收目的基因及载体双酶切后的产物用于连接，连接体系如下：一般载体1微升，目的基因8微升左右（没.测OD）,用T4DNA连接酶（购于TaKaRa公司）1微升，再加酶缓冲液（2.5微升）和水至总体积25微升，16度过夜后第二天转化感受态细菌。目的基因与载体的摩尔数比一般为3至10比1

Answer 2

载体和目的基因用相同的内切酶进行酶切，有了相同的缺口，在DNA连接酶的作用下就能够连接了

Answer 3

一般T4 DNA 连接酶就行啊，以及对应的buffer，然后4度或16度过夜~

Answer 4

T4 DNA 连接酶。。。。