Question

RNA提取后，跑电泳不出条带

抽RNA后，用核酸蛋白测定仪测定浓度时浓度有50ng，但是反转录为cDNA后再PCR就没发现条带，而且用RNA跑电泳也没有发现条带，这是为什么呢？

Answer 1

其实你要首先理解一下电泳染色的原理。
电泳时，我们一般使用的染色剂比如EB啊，GEL-Red啊之类的，都是潜入DNA双螺旋的分子间，所以能拿来作为结合染色染料。而对于RNA，其大多为单链形式存在，这些染料还能进行染色的原因，是因为其的大分子还能发生自身或相互间的2级缠绕，使得染料还有掺入的余地。
那么，如果这些大分子发生降级或者片段化成为小片段，发生自身缠绕的和相互聚合的几率及小了很多，染料难于掺入，当然不显色。
而对于测OD值来说，我们关注的是其吸光度，吸光度这与RNA中的碱基有关，与分子结构无关，所以当然能测出值来。并且，降解和片段化的程度越高，暴露出的碱基愈多，吸光度也越大，测出的值当然也越高，这是不矛盾的。
我这么说可以理解了吧？

追问

意思就说，RNA已经降解了？

追答

是的~~~直接抓住了重点啊~~~

Answer 2

主要原因可能是你提取过程中RNA降解了。操作必须仔细，戴口罩，无酶水等等。内参和目的同时做就知道问题所在了。

Answer 3

RNA电泳检测都没条带，证明RNA提取失败。在做反转录PCR那肯定失败。

把RNA提取好

追问

可是为什么核酸蛋白测定会有浓度呢？