Question

如何将外源基因导入植物细胞并表达

Answer 1

外泌体中的miRNA在病变细胞中的应用：miRNA是一类内源性具有调控功能的非编码RNA，可以与靶mRNA的3’非翻译区结合，从而导致靶基因不同程度的差异性表达。当miRNA运送到远端细胞时外泌体可以保持miRNA的完成性。此外，外泌体中miRNA的分泌常用于的诊病态细胞断。总之，外泌体在病变细胞发生发展中有重要作用，作为病变细胞调控的新机制，为病变细胞的治疗提出了新的思路。此外，着眼于外泌体与质膜构造十分相似，可将其作为许多治疗性的药物的运输载体而运用于再生医学方面。(生物谷 Bioon.com）欢迎咨询：上海宇玫博 咨询电话：4006-166-973宇玫博…

Answer 2

1、介导转化法
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。
农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。
2．基因枪介导转化法
利用火药*或高压气体加速（这一加速设备被称为基因枪），将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。与农杆菌转化相比，基因枪法转化的一个主要优点是不受受体植物范围的限制。而且其载体质粒的构建也相对简单，因此也是目前转基因研究中应用较为广泛的一种方法。
3．花粉管通道法
在授粉后向子房注射合目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者。
至于表达是个十分复杂的过程我想你是不会想了解的。。。

Answer 3

目的基因与运载体结合，构成重组DNA，利用显微注射法导入受体细胞

Answer 4

1、目的基因的获取
2、构建目的基因表达载体 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。（目的基因+质粒+启动子+终止子）
3、将目的基因导入受体细胞：
受体细胞是植物导入的方法一般有三种：
1）农杆菌转化法：原理，Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上（一般针对双子与植物）
2）基因枪法（一般针对单子叶植物）
3）花粉管通道法：比如抗虫棉
4、目的基因的检测和测定