乳糖操纵子的作用是什么? 40
当加入Lac后,Ecoli的lac+ 细胞很快大量合成以上两种酶。进一步用32P标记mRNA作杂交实验(用λlac中的取得的DNA,与加入乳糖后不同时间内产生的32P-mRNA进行分子杂交)结果表明加入的乳糖能激发lac的mRNA的合成。
lac mRNA极不稳定,其半衰期仅有3分钟,这个特点随着诱导很快的恢复。当诱导物一除去转录立即停止,在很短的时间内所有的lac mRNA即被降解掉,细胞内的含量恢复到基础水平。
发展
细菌对环境的改变必需作出迅速的反应。营养供给随时都可能发生变化,反复反常。要能得以幸存必需具有可以变换不同代谢底物的能力。单细胞真核生物也同样生活在不断变化环境中;而更为复杂的多细胞生物都具有一套恒定的代谢途径,而无需对外部环境作出反应。
在细菌中是很需要灵活性,也需要很经济,因为细菌遇到合适的环境就大量消耗营养对其本身也是不利的。在缺乏底物时就不必要合成大量相关的酶类,因此细菌产生了一种调节机制,即在缺乏底物时就阻断酶的合成途径,但同时又作好了准备,一旦有底物存在就立即合成这些酶。
作用是使得一组与乳糖代谢相关的基因受到同步的调控。1961年雅各布(F.Jacob)和莫诺德(J.Monod)根据对该系统的研究而提出了著名的操纵子学说。在大肠杆菌的乳糖系统操纵子中,β-半乳糖苷酶,半乳糖苷渗透酶。
半乳糖苷转酰酶的结构基因以LacZ(z), Lac Y(y),Lac A(a)的顺序分别排列在质粒上,在z的上游有操纵序列Lac O(o),更前面有启动子Lac P(p),这就是操纵子(乳糖操纵子)的结构模式。编码乳糖操纵系统中阻遏物的调节基因Lac I(i)位于和p上游的邻近位置。
结构
细菌相关功能的结构基因常连在一起,形成一个基因簇。它们编码同一个代谢途径中的不同的酶。一个基因簇受到同一的调控,一开俱开,一闭俱闭。也就是说它们形成了一个被调控的单位,其它的相关功能的基因也包括在这个调控单位中,例如编码透过酶的基因,虽它的产物不直接参与催化代谢,但它可以使小分子底物转运到细胞中。
乳糖分解代谢相关的三个基因,lacZ、Y、A就是很典型的是上述基因簇。它们的产物可催化乳糖的分解,产生葡萄糖和半乳糖。它们具有顺式作用调节元件和与之对应的反式作用调节因子。三个结构基因图的功能是:
lacZ编码β-半乳糖苷酶(β-galactosidase),此酶由500kd的四聚体构成,它可以切断乳糖的半乳糖苷键,而产生半乳糖和葡萄糖
乳糖操纵子有以下几个部分:(1)调节基因:调节分泌阻遏物。(2)启动子:启动基因的转录和翻译。(3)操纵基因:与乳糖的结合部位。(4)半乳糖苷酶基因Z、Y、A。
在无乳糖时,调节基因表达阻遏蛋白,结合在位于启动子后的操作基因上,阻止转录的进行,半乳糖苷酶基因不转录。当乳糖存在时,乳糖与阻遏蛋白结合,使得阻遏蛋白不能与操作基因结合,半乳糖苷酶基因转录。
应用:
(1)用于鉴定目的基因是否插入载体。
载体上含有改造过的乳糖操纵子。该乳糖操纵子仅保留半乳糖苷酶基因N端,且在半乳糖苷酶的基因中插入多克隆位点。该载体的宿主为仅能表达半乳糖苷酶C端多肽的大肠杆菌。半乳糖苷酶C端多肽或N端多肽单独存在时,无活性;两者共存时,可发挥半乳糖苷酶活性,可将X-gal分解成蓝色产物。
将载体转入培养于含X-gal的培养基的大肠杆菌中,用IPTG(乳糖类似物)诱导,如果菌落变成蓝色,则说明目的基因未插入;菌落呈白色,则说明目的基因插入。
(2)用于特异性表达目的基因。在目的基因前加乳糖操纵子,则当细胞内无乳糖时,该基因不表达;往培养基中加入乳糖或IPTG后,基因表达。