Question

DNA与PCR凝脂糖电泳问题

DNA经过PCR之后与母液DNA进行凝脂糖电泳,母液DNA有显色结果,但是PCR没有,排除PCR过程可能出错的原因之外,还有可能因为什么?
谢谢

Answer 1

电泳成像体系：凝胶是否正常，是否添加EB（溴化乙啶）或EB是否降解了，上样时是否样品大量泄露，凝胶成像系统能否正常工作。
由于，你的母液DNA相当于正对照，该正对照有正常的显色结果，这表明电泳成像体系运转正常。
但是有两点需要确定，一是，你的PCR产物上样时添加的loading buffer的种类和浓度是否与正对照的一致；二是，你在上样PCR产物时，有没有把点样孔的底部戳破，致使上的样品全部渗出至凝胶之外了。
还有需要考虑的是：1.你的母液DNA确定了是DNA样品，不是没有清除干净的RNA。
因为，提取DNA时经常会提取出RNA样品，而且没有经过RNase处理的话，会残留非常多的RNA，如果你的DNA样品又是比较小的话，很容易弄混。
2.你的PCR目的产物是否比较小，而母液DNA片段比较大，你电泳时间偏长，导致小分子片段已经跑出了凝胶。
虽说，你排除了PCR过程可能会出错，我建议你还是重新合成一对引物再试试（因为，有时合成出来的引物，配成溶液后，即使在-20度冰箱保存，还是出现降解的现象，这种现象比较少见，但是出现过。），另外，仔细核对下你的PCR反应液配置是否出错，PCR反应参数设定是否有问题

Answer 2

一般是PCR没有产物，因为PCR体系中的DNA模板很少，跑电泳看不到，而母液有，则模板没问题，电泳没问题，只有PCR失败了。

Answer 3

时间太长了 小分子的片段跑出去了 按你所描述的也只有这个可能了