琼脂糖凝胶电泳分离核酸分子的实验步骤大体有哪几步
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首先当然是把核酸提取出来啦!
接着就是制胶了,一般都是制浓度为1%的琼脂糖胶,比如我们做20ml的胶,就是量20ml的TBE和称取0.2g的琼脂糖,微波炉加热煮至透明无亮晶晶的小点(也就是琼脂糖全部融化完,大概煮1min),等温度降到60℃左右(放在你的手上感觉到很烫,但是能忍受10秒钟就行了),加入1微升的核酸染料(我们用的是北京鼎国的GoldViewTM 核酸染料,这种核酸染料毒性不大),摇匀之后倒胶,避光冷却大概30min。
第三是点胶。把凝好的胶取出来放在有与制胶同浓度TBE缓冲液的电泳槽中,取每1微升Loading Dye(一种沉淀剂,使点胶后样品沉到胶孔底部不浮上来)混匀5微升的核酸样品。
四是电泳啦!电压电流和事件看你的样品而定吧,一般这种小胶我们是用110V、400mA跑25min就可以了。
最后当然就是在紫外凝胶成像系统看结果啦!
接着就是制胶了,一般都是制浓度为1%的琼脂糖胶,比如我们做20ml的胶,就是量20ml的TBE和称取0.2g的琼脂糖,微波炉加热煮至透明无亮晶晶的小点(也就是琼脂糖全部融化完,大概煮1min),等温度降到60℃左右(放在你的手上感觉到很烫,但是能忍受10秒钟就行了),加入1微升的核酸染料(我们用的是北京鼎国的GoldViewTM 核酸染料,这种核酸染料毒性不大),摇匀之后倒胶,避光冷却大概30min。
第三是点胶。把凝好的胶取出来放在有与制胶同浓度TBE缓冲液的电泳槽中,取每1微升Loading Dye(一种沉淀剂,使点胶后样品沉到胶孔底部不浮上来)混匀5微升的核酸样品。
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