Question

双荧光素酶报告基因检测实验技术服务

Answer 1

1、  实验简介

Luciferase报告基因系统是以 荧光素(luciferin) 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 (fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光（波长540-600nm），且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的稳定性及翻译效率相关。从而将待测启动子、UTR等序列与荧光素酶ORF框融合表达，再检测其发光强度，就能判断这些序列对蛋白表达的影响

为了减少实验误差，同时转染一个能稳定表达的 肾荧光素酶 的质粒作为内参，催化 腔肠素 氧化产生蓝光（波长460-540nm）；所以叫双荧光素酶报告基因检测。

2 . 实验流程图

3 . 服务内容：双荧光素酶报告检测启动子活性服务主要分为以下两种：

a .   启动子活性分析，用于检测待测启动子是否有活性及其活性区域；

b .   启动子与转录因子结合验证，用于研究某转录因子是否调控某基因的待测启动子，以及它们的结合区域

项目 服务内容 结果交付 实验周期 客户提供

启动子活性分析 合成和构建2kb启动子荧光素酶载体载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告30工作日1、细胞

2、基因信息

构建截短启动子荧光素酶载体载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

细胞培养和双荧光素酶检测检测数据和实验报告

启动子与转录因子结合验证 合成和构建野生型启动子荧光素酶载体载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告30工作日[if !supportLists]1、 [endif]细胞

[if !supportLists]2、 [endif]基因及转录因子信息

构建突变型启动子荧光素酶载体载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

构建转录因子表达载体载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

细胞培养和双荧光素酶检测检测数据和实验报告

 

4. 送样要求

a.重组载体：

质粒不少于2ug，或甘油菌约100ul

b.细胞：

活细胞，2个T25瓶，细胞汇合度＞80%（广州市内）；或冻存细胞2管（广州外地区）

备注：载体或细胞可由如期代为构建或购买

 

5. 样本保存和运输要求：

a. 质粒或甘油菌可用冰袋保存运输；

b. 活细胞常温取样；

c. 冻存细胞干冰取样/运输：需要至少在送样前一天通知我方