Question

液相色谱法所用流动相使用时应注意什么问题

Answer 1

液相色谱法所用流动相使用时应注意问题如下：

尽量使用高纯度溶剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。不纯的溶剂会引起基线不稳，产生伪峰。避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降和损坏色谱柱，如使固定液溶解流失和酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。

样品在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。流动相粘度低（粘度适中）。若使用高粘度溶剂，会增高压力，不利于分离。常用低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。

但粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷等，它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。化学稳定性好。流动相应满足检测器的要求。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。

所谓溶剂的紫外截止波长是指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，会严重干扰组分的吸收测量。对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达到最高灵敏度。

原理和分类

液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。

根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。近年来，在液相柱色谱系统中加上高压液流系统，使流动相在高压下快速流动，以提高分离效果，因此出现了高效液相色谱法。