Question

western blot时mark总是出不来 是为什么

Answer 1

一、Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法 ：

原因分析                                                                        解决办法         

1. 一抗和二抗失效                                                        1.  更换抗体；选择现用现配的工作液

2. 2.一抗和二抗不匹配                                                     2. 更换为同种同属的同亚型的抗体底物

3. 3.发光液失效                                                              3. 更换新的发光液

4. 4.抗体染色不充分                                                        4. 增加抗体浓度；延长孵育时间

5. 5.被测样品中不含有目的蛋白质或者目的 蛋白质含量太低    5. 设置阳性对照。确定标本中是否含有目的蛋白质；

6. 增加样品 的上样量。

7. 6. 溶液中有辣根过氧化物酶的抑制剂                         6.用透析和超滤除去所用溶液中如叠氮化钠之类的抑制剂

8. 7.抗体活力降低                                                     7.在抗体活力保存时间内使用抗体；工作液现用现配

二、WB出现白斑是因为转膜过程有气泡存在；或者抗体的分布不均匀，孵育抗体时要使用摇床。

三、剪好的PVDF膜在使用前需要甲醇里泡1-2min，在零度的转膜液中孵育3-5min。

四、一抗与二抗的专一性识别检测，就是蛋白质-蛋白质相互作用检测，方法很多，免疫共沉淀、Pull down、MADLI-MS、能量转移、分子筛层析等。