Question

PCR中怎样预防出现假阳性结果

Answer 1

假阳性的现象就是在空白对照出现目的扩增产物，原因是靶序列或扩增产物的交叉污染。所以，只要实验过程中注意防止交叉污染就行了。
做PCR实验主要注意以下几点：
1，操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；
2，除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。
3，各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存。

Answer 2

考虑假阳性的来源，一个产物污染，这个是最严重的，二是样本间交叉污染，三是引物设计的不特异，针对第一种问题，建议使用UDG酶，而且一定要严格管理实验室，三个分区的物流人流是怎么样要严格执行。样本交叉污染建议样本提取过程中尽量避免使用煮沸裂解之类比较剧烈的手段，可以考虑磁珠提取，当然强阳性样本磁珠也不行，这时最好是手工磁珠提取，因为有些厂家的半自动提取仪器很扯淡，比如西安天隆，混匀很剧烈容易产生交叉污染，第三种情况就没啥可说的，换对引物，好好比对一下。当然了，说起来很简单，真要做起来非常难。

Answer 3

不考虑操作问题（看一楼）。
你要设计好实验，关键是引物选取。现在各大数据库有很多信息，可以blast一下。还有做菌落PCR检测，最好可以用载体上的引物