DNA的检测技术有哪些?
展开全部
DNA检测技术有很多,主要分为定性和定量方法。
给你举几个:
1,分子杂交技术,(包括southern杂交,northern杂交,基因芯片等)
分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,最后可用不同的检测方式进行检测,发光检测和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下
2,基于DNA结合蛋白的方法
Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,最后放于有尿素溶液的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测残余DNA含量的目的。
3,PCR法,其中以实时定量PCR法最为突出
荧光定量PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测残余DNA含量的目的。
此外,对DNA的定量技术也有很多,可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》
给你举几个:
1,分子杂交技术,(包括southern杂交,northern杂交,基因芯片等)
分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,最后可用不同的检测方式进行检测,发光检测和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下
2,基于DNA结合蛋白的方法
Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,最后放于有尿素溶液的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测残余DNA含量的目的。
3,PCR法,其中以实时定量PCR法最为突出
荧光定量PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测残余DNA含量的目的。
此外,对DNA的定量技术也有很多,可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》
2012-07-04
展开全部
DNA分子杂交技术。
已赞过
已踩过<
评论
收起
你对这个回答的评价是?
推荐律师服务:
若未解决您的问题,请您详细描述您的问题,通过百度律临进行免费专业咨询