Question

蛋白质化学测序法原则程序课归纳为哪五个阶段

Answer 1

蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析，即蛋白质一级结构的测定，主要包括以下几个步骤：
1.测定蛋白质分子中多肽链的数目。 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。
2.多肽链的拆分：几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).

3.二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的b-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。

4.测定每条多肽链的氨基酸组成：水解,氨基酸分析仪
5.分析多肽链的N-末端和C-末端 l多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸和C-端氨基酸。 l在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。
6.多肽链断裂成多个肽段，可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。
7.分离肽段测定每个肽段的氨基酸顺序。
8.确定肽段在多肽链中的次序。
9.确定原多肽链中二硫键的位置。

Answer 2

1、纯化蛋白质
2、还原所有的二硫键，用碘乙酸阻断其氧化还原作用
3、用溴化氢或蛋白酶裂解肽
4、分离肽段并进行测序
5、寻找相互重叠的两组序列，确定全长序列
希望能够帮助你。