Question

急求！做PCR电泳没结果的可能原因？详细内容请看问题补充，谢谢！

昨天做了一次，25ul体系中加入0.5ugDNA、0.2ul普通Taq酶，电泳没结果（看图一），； 今天用同样的DNA ，再做一次PCR，改用EX Taq酶，量不变，并把模板DNA量加倍，25ul体系中共加了1.0ug的DNA，电泳还是没结果（看图二）！求大神帮我分析可能的原因。两次电泳，maker都有出来条带的。

图一

图二





Answer 1

这个问题不是电泳的问题，你的Marker已经说明了，但是要找到PCR的问题，你给的信息是不够的。

例如每一张电泳图中，每一个仿扒泳道分别是什么？因为泳道之间是各有不同的。

用漏大唯的DNA模板什么来源？质粒，基因组DNA，还是什么？有弥散，如果不是来自于扩增，那么有可能是来自于降解了的DNA模板，或者是部分酶切的模板。

假设其他因素不考虑，可以做如下假设：

1. 模板降解

2. 引物不合适，无法获返培得特异扩增片段

3. 反应体系中其他东西失效，酶，dNTP等

只有有了更详细的信息，才能做出判断。