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主要区别是，版本不同、组成不同、发布和实施时间不同，具体如下：
一、版本不同
1、1996年颁布
幼儿园工作规程（试行）。
2、2016年颁布
2016年3月1日，教育部发布《幼儿园工作规程》，强调幼儿园应当结合幼儿年龄特点和接受能力开展反家庭暴力教育，发现幼儿遭受或者疑似遭受家庭暴力的，应当依法及时向公安机关报案。同时，针对多次被爆出的幼师虐童案，《工作教程》也再次强调，严禁虐待、歧视、体罚和变相体罚、侮辱幼儿人格等损害幼儿身心健康的行为。
二、组成不同
1、1996年颁布
内容包括：总则，幼儿园的招生、编班，幼儿园的卫生保健，幼儿园的教育，幼儿园的园舍、设备，幼儿园的工作人员，幼儿园的经费，幼儿园与幼儿家庭， 幼儿园的管理工作，附则，共 10 章，60条。
2、2016年颁布
内容包括：总则，幼儿入园和编班，卫生保健，幼儿园的安全，幼儿园的卫生保健，幼儿园的教育， 幼儿园的园舍、设备，幼儿园的经费，幼儿园、家庭和社区，幼儿园的管理，附则，共11章，66条。
三、发布和实施时间不同
1、1996年颁布
发布时间：1996年3月9日。施行时间：1996年6月1日起。
2、2016年颁布
发布时间：2016年1月5日。施行时间：2016年3月1日。
参考资料来源：百度百科-幼儿园工作规程(试行)
参考资料来源：百度百科-幼儿园工作规程
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