为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA呢
4个回答
研载生物科技(上海)有限公司_
2023-04-12 广告
2023-04-12 广告
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在检测RNA表达量的时候,由于RNA不稳定,容易降解,就先反转录为cDNA,再去PCR。
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你做的是不是RT-PCR哦 这个就是以反转录得到的cDNA为模板的
追问
哦,那用mRNA反转录得到的DNA与原始体内的DNA有什么区别呢,为什么不能用本体内的DNA呢,麻烦您进一步解答
追答
我们做的时候一般是提取植物总的RNA,然后采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,主要是获得目的基因或检测基因表达,判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。因为直接提取DNA的话,并不能证明该基因在其他细胞体内进行表达,通过这种方法可以克服假阳性。以上只是个人观点,仅供参考,o(∩_∩)o
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你的引物是设计宴搭到这个基因编码区的什么位置的? 你考虑下是罩此不是cDNA的降解问题。还有你试验的时候降低退火温度,不要提物祥迅高。提高更扩不出来了。 再提高
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