为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA呢

匡雅霜Rn
2012-07-31 · TA获得超过1.4万个赞
知道大有可为答主
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那要看你想要扩增的是什么基因片段了。cDNA是由RNA反转录而来。
有直接用基因组DNA跑PCR,樱伍为了是得到基因组本身的DNA片段或做DNA检测等;蔽物
而用cDNA扩增是为了得到基因的外显子片段或者宏颂液检测目的基因是否表达等,这样制备的DNA片段还可用于目的基因的过表达等。
研载生物科技(上海)有限公司_
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czl939
2012-07-31
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在检测RNA表达量的时候,由于RNA不稳定,容易降解,就先反转录为cDNA,再去PCR。
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2木一木2
2012-07-31
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你做的是不是RT-PCR哦 这个就是以反转录得到的cDNA为模板的
追问
哦,那用mRNA反转录得到的DNA与原始体内的DNA有什么区别呢,为什么不能用本体内的DNA呢,麻烦您进一步解答
追答
我们做的时候一般是提取植物总的RNA,然后采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,主要是获得目的基因或检测基因表达,判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。因为直接提取DNA的话,并不能证明该基因在其他细胞体内进行表达,通过这种方法可以克服假阳性。以上只是个人观点,仅供参考,o(∩_∩)o
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2012-07-31 · TA获得超过641个赞
知道小有建树答主
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你的引物是设计宴搭到这个基因编码区的什么位置的? 你考虑下是罩此不是cDNA的降解问题。还有你试验的时候降低退火温度,不要提物祥迅高。提高更扩不出来了。 再提高
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