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你的胶是考染的吗?
首先你得先知道一点蛋白质的基本理论知识(不会不知道吧?难道你是学医的?),或者说蛋白质(包括其他分子,如DNA、RNA等)电泳的原理(或者说是分离原理)。只说蛋白质:蛋白质在正常情况下,一般带有负电荷,因由不同的蛋白分子因为性质(空间结构以及基团性质)不同而带电量不同,这样结合蛋白质分子本身的不同质量,会在电场下(即电泳中)产生不同的移动速度,进而将不同的蛋白分离开。又为了消除蛋白质分子间性质的差别,创造一个单一因素的电泳分离条件,所以在进行蛋白质电泳之前,都会对蛋白质进行变性处理(非变性胶等不在此列),使蛋白质肽链打开:SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
如此,蛋白质(准确的说应该是变形后的蛋白质或者是蛋白- SDS胶束)便会在电场中根据不同的带电量- 亦即分子量而分成不同的条带。每一条带代表着不同分子量大小的蛋白质组合(一组蛋白质)。
上面只说的是SDS-PAGE胶蛋白质电泳。当然,在电泳后,需要进行染色,你才能看到蛋白条带(Marker除外,因为它是带有耦合染料的蛋白质分子或片段)。
首先你得先知道一点蛋白质的基本理论知识(不会不知道吧?难道你是学医的?),或者说蛋白质(包括其他分子,如DNA、RNA等)电泳的原理(或者说是分离原理)。只说蛋白质:蛋白质在正常情况下,一般带有负电荷,因由不同的蛋白分子因为性质(空间结构以及基团性质)不同而带电量不同,这样结合蛋白质分子本身的不同质量,会在电场下(即电泳中)产生不同的移动速度,进而将不同的蛋白分离开。又为了消除蛋白质分子间性质的差别,创造一个单一因素的电泳分离条件,所以在进行蛋白质电泳之前,都会对蛋白质进行变性处理(非变性胶等不在此列),使蛋白质肽链打开:SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
如此,蛋白质(准确的说应该是变形后的蛋白质或者是蛋白- SDS胶束)便会在电场中根据不同的带电量- 亦即分子量而分成不同的条带。每一条带代表着不同分子量大小的蛋白质组合(一组蛋白质)。
上面只说的是SDS-PAGE胶蛋白质电泳。当然,在电泳后,需要进行染色,你才能看到蛋白条带(Marker除外,因为它是带有耦合染料的蛋白质分子或片段)。
追问
嗯,谢谢,我知道代表的是一组蛋白,但那么多带,都说明什么,一般来说,拿一张蛋白电泳图,应该怎么看?看些什么?
追答
首先,你得知道你实验的目的是什么?你的目的蛋白是什么?目的蛋白的分子量是多大?这样,你才能找到你想要的条带。如果你仅仅是为了看蛋白条带,那么我无语。但还是向你解释一下:上面说了,每个条带代表了一组蛋白,但是你做实验的-具体而言是跑胶,做蛋白质电泳的话,一般都是有有对照的,而且一般情况下,都是做差异性的比较(定性或者定量),即不同泳道之间蛋白质(条带)的表达差异(WB的结果更直接能说明问题,双向电泳同)。举个例子:不同刺激条件下(如温度、时间、药物等),某一或某些蛋白(或者是诱导蛋白)的表达差异或变化情况,即可通过蛋白质电泳及其后续实验,得到结果(或证实)。
所有,不是说应该怎么看,看什么,而是你想看什么。
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