Question

免疫组化和原位杂交的区别

Answer 1

原位杂交是基于核酸水平，免疫组化是基于蛋白水平，互不干扰，
一般情况下，对一个编码蛋白的基因而言，如果你有好的抗体做免疫组化，是没有必要做原位杂交，因为这种情况下，你看基因的最终产物－－蛋白的定位对研究基因功能更有意义。除非你怀疑这个基因有明显的转录后调控，而且研究这种转录后调控对你的实验有什么特殊的生物学意义，你同时做二者是可以得到一些信息。
如果没有好的抗体，原位杂交不失一种选择，但对某些实验室来说，老板可能还考虑到成本，特别是比较大量的样品的表达的时候，用传统的原位杂交比免疫组化来得便宜。另外，如果你研究的是miRNA之类的话，免疫组化是无能为力，你只能用原位杂交看定位了。

Answer 2

1、定义不同
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
2、作用不同
免疫组化：标本，实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

抗体，免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

常用染色方法，根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。

原位杂交：细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；
感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；
癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；
基因在染色体上的定位；
检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；
分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。
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3、意义不同
免疫组化：近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。
尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。
原位杂交：原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点，
应用带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质）DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位；
用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
参考资料：/baike.baidu.com/item/%E5%8E%9F%E4%BD%8D%E6%9D%82%E4%BA%A4/2153296?fr=aladdin"target="_blank"title="只支持选中一个链接时生效">百度百科-原位杂交
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