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2.液体样品检测：直接取澄清液体样品1ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值即为样品中亚硝酸盐（以NaNO2计）的含量mg/L。如果亚硝酸盐的含量是以氮（N）为计算单位（如饮用水或水源水等），读取色阶上的数值后除以5即可。如果亚硝酸盐的含量是以亚硝酸根（NO2-）为计算单位（如矿泉水、瓶装饮用纯净水等），读取色阶上的数值后除以3.28即可。
3.乳浊样品检测：牛乳及豆桨可直接取1ml加入到检测管中，，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值乘以2即为样品中亚硝酸盐的近似含量mg/L。
4.固体或半固体样品检测：取粉碎均匀的样品1.0g或1.0ml至10ml比色管中，加蒸馏水或去离子水（纯净水）至刻度，充分震摇后放置，取上清液（或过滤或离心得到的上清液）1.0ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg，L（以NaNO2计）。如果测试结果超出色板上的最高值，可定量稀释后测定，并在计算结果时乘上稀释倍数（如从10ml比色管中取出1.0mL转入另一支10ml比色管中，加水至刻度，从中取1.0mL加入到检测管中测定，测试结果乘上100（倍稀释）即为样品中亚硝酸盐的含量。
5注意事项
5.1亚硝酸盐含量较高时，试剂显红色后不久会变为黄色，将黄色溶液再稀释放入另一新的速测管中又会显出红色，由此区分是亚硝酸盐还是食用盐。
5.2当样品反应后的颜色大于标准色板2.00mg/L色阶时，应将样品稀释后再测，计算结果时乘上稀释倍数。
5.3生活饮用水中常有亚硝酸盐存在，不宜作为测定用稀释液。
6试剂质量控制
6.1将0.025、0.1、0.25、0.5、1、2、5mg/LNaNO2标准溶液分别加入装有固体格林试剂的速测管，盖盖将试剂摇溶，10min后与标准色板进行对比，其含量与色板上的色阶标识含量应当相同或相近。
厦门鲎试剂生物科技股份有限公司
2023-08-01 广告
食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒，3克导致死亡。
检测方法
1.取病人静脉血3~5毫升，血色呈蓝紫色。
2.离心沉淀，血浆呈淡黄色，说明蓝紫色是细胞本身异常所致。
3.摇匀后在氧气或空气中振摇15分钟，若恢复为鲜红 色则表明原蓝紫色是低铁血红蛋白被氧化所致。
4.通过以上简单的试验，基本上可作出初步判断。
亚硝酸盐的检测方法有很多，举例：
1、重氮偶合法
检测原理 ：
纸片上的试剂为固体格利斯试剂(对氨基苯磺酰胺和N21萘基乙二胺) :亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺重氮化,再与N21萘基乙二胺产生偶合反应,生成紫红色偶氮料
适用范围 ：
适用检测样品 一般用于下列5类食品的检测 ①蔬菜类; ②肉制品类; ③腌类; ④调味品; ⑤水。
检测方法 ：
①取样品适量约10 g左右,绞碎,加水大约25ml混合;
②取出1个试剂条放入溶液中2 s
③从溶液中将试剂条取出,放置1 min;
④观测试剂条底部反应垫所出现时比对试剂瓶外所显示的颜色及浓度;灵敏度(mg/L, ppm) 0,0. 15, 0. 3, 1.0,1.5, 3. 0 (1. 0为美国EPA标准)
⑤目视比色,记录结果,计算公式:x =w ×2510式中: x—亚硝酸盐含量,mg/kg;—试纸条上读数, mg/L
2、盐酸萘乙二胺法
检测原理 ：
试样沉淀蛋白质、除去脂肪厚，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
检测范围
香肠、腊肠、火腿、腊肉、肴肉等熟肉制品
检测试剂 ：
氯化铵缓冲溶液（pH9.6～9.7）
硫酸锌溶液（0.42mol/L）
氢氧化钠溶液（20g/L）
对氨基苯磺酸溶液
盐酸萘乙二胺溶液（别名N–1–萘基乙二胺）（1g/L）
亚硝酸钠标准溶液（500µg/mL）
显色剂 ：临用前将盐酸萘乙二胺溶液（lg/L）和对氨基苯磺酸溶液等体积混合
样品处理 ：
称取约10.00g（粮食取5.00 g）经绞碎混匀的样品，置于捣碎机中，加70 mL水和12mL氢氧化钠溶液（20g/L），混匀，用氢氧化钠溶液调pH8，定量转移至200mL容量瓶中，加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。置60℃水浴中加热10 min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。
测定 ：
（1）标准曲线的制备：吸取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0、2.5、5、10、15、20、25µg亚硝酸钠），分别置于25mL具塞试管中。于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液，加2.5mL60%冰乙酸后，立即加入5.0mL显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处放置25min。用1cm比色杯（灵敏度低时可换2cm比色杯），以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。低含量样品制备标准曲线时的标准系列为：吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0、2、4、6、8、10µg亚硝酸钠）。
（2）样品测定 吸取10.0mL样品滤液于25mL比色管中，以下操作按标准曲线制备中自“于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。
计算：
亚硝酸盐的含量（mg/kg）＝ A×1000／m×V2/V1×1000
式中：m——样品质量，g； M1——测定用样液中亚硝酸盐的质量，µg；, V1——样品处理液的总体积，mL；V2——测定用样液的体积，mL
一、目的与要求：
1、明确亚硝酸盐的测定与控制成品质量的关系。
2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。
二、原理：
样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与萘基盐酸二氨乙烯偶联成紫红色的重氮染料，产生的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，可以比色测定。
三、试剂与仪器
1、亚铁氰化钾溶液：称取106克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至1000毫升。
2、乙酸锌溶液：称取220克乙酸锌[Zn(CH2C00)2·2H20]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。
3、饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。
4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。
5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。
6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。
7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。
8，小型绞肉机。
9、分光光度计。
四、操作方法：
1、样品处理：称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升烧杯中，加工2.5毫升饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约30毫升将样品全部洗入500毫升容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤弃去初滤液30毫升，滤液备用。
2、测定
吸取40毫升上述滤液于50毫升比色管中，另吸取0.00、0.20、0．40、0．60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50毫升亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、5、7、10、12.5微克亚硝酸钠)，分别置于50毫升比色管中，于标准与样品管中分别加入2毫升0.4％对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5分钟后各加入1毫升0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2厘米比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。
计算： X=(A×1000)/(m×40/500×1000×1000)
X：样品中亚硝酸盐的含量，g／kg；
m：样品质量，g；
A：测定用样液中亚硝酸盐的含量，ug．
参考资料： http://www.foodmate.net/jianyan/lihua/xiangmu/12094.html
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2. 液体样品检测：直接取澄清液体样品1ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值即为样品中亚硝酸盐的含量mg/L（以NaNO2计）。（牛乳及豆桨也可直接检测，结果不得超过0.25mg/L ，有颜色的液体样品可加入一些活性炭脱色过滤后测定）。
3. 固体或半固体样品检测：取粉碎均匀的样品1.0g或1.0ml至10ml比色管中，加蒸馏水或去离子水（纯净水）至刻度，充分震摇后放置，取上清液（或过滤或离心得到的上清液）1.0ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg，L（以NaNO2计）。如果测试结果超出色板上的最高值，可定量稀释后测定，并在计算结果时乘上稀释倍数（如从10ml比色管中取出1.0mL转入另一支10ml比色管中，加水至刻度，从中取1.0mL加入到检测管中测定，测试结果乘上100（倍稀释）即为样品中亚硝酸盐的含量
