请问有谁能提供用流式细胞仪检测CD4+CD25+CD127low/-调节T细胞的详细步骤,另外检测是否可用冰冻血?
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你需要6种抗体:
CD4-标记荧光1
CD25-标记荧光2
CD127-标记荧光3
加上标记了三种对应荧光的同型非特异抗体。
先用同型非特异抗体分别染色的细胞调节阴性阈值。然后再用已知阳性(或者是对应荧光相同的珠子)的细胞调节机器的光谱代偿。
然后检测染色的样本。先在点阵图设好CD4,CD25双阳性,然后再柱状图到处双阳性的看CD127的分布,得到读数
尽量选新鲜血液。
CD4-标记荧光1
CD25-标记荧光2
CD127-标记荧光3
加上标记了三种对应荧光的同型非特异抗体。
先用同型非特异抗体分别染色的细胞调节阴性阈值。然后再用已知阳性(或者是对应荧光相同的珠子)的细胞调节机器的光谱代偿。
然后检测染色的样本。先在点阵图设好CD4,CD25双阳性,然后再柱状图到处双阳性的看CD127的分布,得到读数
尽量选新鲜血液。
追问
是在抗凝血中直接加抗体吗,需不需要离心。我从未做过,希望步骤能再详细点,谢谢!
追答
当然不是。需要低渗去掉红细胞。离心去掉血浆。如果你从来没有做过,最好找个详细的protocol,照着做。或者请个做过的人手把手教你一次。上机肯定是要请人了。染色的步骤按照protocol还是可以自己做的。
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