Question

请问有谁能提供用流式细胞仪检测CD4+CD25+CD127low/-调节T细胞的详细步骤，另外检测是否可用冰冻血？

Answer 1

你需要6种抗体：
CD4-标记荧光1
CD25-标记荧光2
CD127-标记荧光3
加上标记了三种对应荧光的同型非特异抗体。

先用同型非特异抗体分别染色的细胞调节阴性阈值。然后再用已知阳性（或者是对应荧光相同的珠子）的细胞调节机器的光谱代偿。

然后检测染色的样本。先在点阵图设好CD4，CD25双阳性，然后再柱状图到处双阳性的看CD127的分布，得到读数

尽量选新鲜血液。

追问

是在抗凝血中直接加抗体吗，需不需要离心。我从未做过，希望步骤能再详细点,谢谢！

追答

当然不是。需要低渗去掉红细胞。离心去掉血浆。如果你从来没有做过，最好找个详细的protocol，照着做。或者请个做过的人手把手教你一次。上机肯定是要请人了。染色的步骤按照protocol还是可以自己做的。