琼脂糖凝胶电泳使用什么染色?需要注意什么问题?
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用琼脂糖作支持介质。另外,实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭(EB)。
要注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带则不易观察,出现条带模糊的现象。其好处是染色效果好,操作方便,但是稳定性差,具有毒性。
一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
扩展资料
琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。
但由于其孔径相比于蛋白质太大,对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道,现广泛应用于核酸的研究中。
参考资料来源:百度百科——琼脂糖凝胶电泳
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琼脂糖凝胶电泳的染料有许多种,近几年较常用的有:
EB-溴乙锭,EB有较大毒性,可致癌,所以使用时一定要万分小心。EB染色的背景较强。
SYBR Green--也叫荧光绿如蓝,低毒性,但检测灵敏度没有EB高。
GelRed--号称无毒,无皮肤渗入型,有伤口就不好说了。背景荧光弱,但加多了容易出现拖带。由于在市场上价格较高,所以有出现很多仿冒货,买时要擦亮眼睛。
EB-溴乙锭,EB有较大毒性,可致癌,所以使用时一定要万分小心。EB染色的背景较强。
SYBR Green--也叫荧光绿如蓝,低毒性,但检测灵敏度没有EB高。
GelRed--号称无毒,无皮肤渗入型,有伤口就不好说了。背景荧光弱,但加多了容易出现拖带。由于在市场上价格较高,所以有出现很多仿冒货,买时要擦亮眼睛。
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主要使用EB进行染色。但是EB剧毒,注意不要直接用手接触,染色时候应该做好防护。
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