Question

为什么在用试剂盒抽提质粒的时候加入溶液二后任然是浑浊的 加入溶液三后没有沉淀！！

试剂盒是可用的。大肠杆菌形态是正常的

Answer 1

你溶液二加得不够，菌体量太多，裂解不开。可以多加点，当然，溶液三也要成比例地增加。

然后你检查下溶液二是否还能用，溶液二的主要作用物是NaOH和SDS，NaOH主要用来裂解，容易变质，还有SDS，溶液三形成沉淀主要是SDS的原因。

追问

谢谢啊 你说的问题我都试过了 ，没得到结果。我现在换菌株了 ，结果正常了！！

追答

= = 你难道抽的是BL21的质粒……

Answer 2

首先先保证溶液二是否还可用，因为随着时间的延长，溶液的碱性会降低，这样就会降低裂解效率。其次保证溶液二的量足够，如果是DH系列的大肠杆菌，过夜培养后取1ml离心获得菌体，一般而言，溶液一加100微升-150微升，溶液二加200-300微升，溶液三加150-200微升，且溶液二和溶液三加入后需要冰浴3-5min。刚加入后要颠倒混匀，但是不能力量太大，否则质粒可能断裂。