Question

长片段PCR 扩不出，可能的原因是什么

Answer 1

具体是什么现象？是有短片段被扩增出来，还是就彻底没有看到任何条带？
通常如果片段长度很长，扩增失败有可能是因为超出了聚合酶的合成能力。所以也需要看你要扩增的片段，是否在你的扩增酶能力范围之内。如果片段特别长，建议使用长片段扩增酶。
另外，延伸时间是否充分。本来要合长片段就需要延伸时间足够长。建议根据长片段扩增酶的说明书进行PCR条件设定。
当然，最基本的是首先需要确定在样品中有目标片段，很多长片段扩增的时候，是预计有这么长，但实际样品中的情况不同。所以如果有扩增得到短的片段，也建议测序看看，扩增得到的是什么，再判断。

Answer 2

长片段有时是引物不好扩，有时是GC含量的问题要换buffer，你要把楼上仁兄的那些情况先排除，保证一切正常再找原因。