PCR循环次数是否越多越好?为什么
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当然不是越多越好。
循环次数过多,并不会计产物也随之过度增加。因为再次循环都有高温到低的温度变化,聚合酶的活性有限,而且一般体系中引物和原料的量也不会是无限供应的。
另外循环次数过多,产物间可能会形成较为复杂的结构,影响其作为模板的效率,因此循环次数不是越多越好,一般PCR反应的循环不超过35次。
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PCR的原理
PCR是聚合酶链式反应的简称,是体外快速扩增特定基因或DNA序列最为常用的方法之一。具体过程是将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子,DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合系中的四种脱氧核苷酸合成新生的DNA互补链。重复这一过程便可使目的DNA片段得到大规模扩增。
研载生物科技(上海)有限公司_
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PCR循环次数通常就是30左右。循环数太多了,虽然可以一定程度的提高产物量,但是由于反应时间过长,有一些非特异产物的扩增也会相应增加,而且随着酶的扩增能力下降,合成目标片段的能力也会随之下降,也可能引起其他的非特异扩增。dNTP也会消耗,如果有某一种dNTP消耗比较大,后续扩增就难免会引起错配。所以如果产物已经足够用于后续分析,一般都不太会过度延长循环次数的。
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不是的,随着反应的进行,酶会逐渐失活、dNTP等原料会逐渐消耗掉。因此在一定范围内,随着反应循环数的增加,产物会增多;但超过了就不好了。
一般设置30-35个循环就很够了
一般设置30-35个循环就很够了
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