Question

请解释一下如何用半定量PCR检测基因的表达量，要详细的过程和这么做的原因，非常感谢

情况是这样，我知道首先需要通过调内参基因到相同亮度来确定反应物的量，然后呢，怎么测出这个基因在不同胁迫条件下的表达量，那个表达量的图是根据什么画出来的，谁能给我解释一下

Answer 1

我觉得你做一个实时定量吧……半定量现在谁还用啊。你要是有荧光定量PCR，就自己做。没有就送出去公司做，你要想学自己跟过去在公司看着他做。半定量多半是终点定量，重复性不好，也不是很准（话说定量PCR也有不少问题，不过最起码比半定量好）。

你如果要做半定量，首先要把RNA浓度调到比较一致。内参的存在虽然可以一定程度矫正浓度的误差，不过那也是在quantity one这类图像分析软件里看的，还是可能会有人为不可避免的差别。（话说半定量有好多种设计策略，什么竞争性、非竞争性，我不知道你是不是把内参引物和目的基因引物拿到一个管子里P，或者是分开P）
最后表达量图画法很简单，你就拿你的每一个体的目的基因的丰度值减去自身内参基因的丰度，然后选则一个个体作为标准，用excel画柱状图就行了。

Answer 2

楼下说的不错,我们实验室现就有人做定量和半定量.重要的是样品的量和一致才行。个体不同组织~mRNA提取~PCR扩增~电泳检测~看电泳条带的明暗，观察基因表达情况。这只是粗略的方法。要精确的话，还是用定量靠谱一点。

Answer 3

主要有mRNA提取，RT—pcr，电泳检测，个人觉得关键是反应条件必须一致，这样跑出来的内参才能差不多一样亮，目的条带的灰度比内参才能准确点，建议做荧光定量，半定量已经不流行了

Answer 4

百度文库里面一大堆 这种东西最好还是找做过的人给你演示一遍比较靠谱 手抖一下就是好几倍的差别