Question

如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基

如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR　为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点．已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点．据图回答：（1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有______、______、______三种．若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行______．（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验．之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是______；（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是______，其合成的产物是______，此过程称为______，原料是______．（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是______．

Answer 1

（1）由于含有目的基因的DNA片段和质粒上均含有EcoRI酶的切割位点，所以用此酶切割后产生相同的黏性末端．这样，具有相同黏性末端的片段用DNA连接酶均可连接，从而产生3种连接产物，目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物，所以要进行分离纯化．
（2）由于将细胞放入含四环素的培养基，要将存活tct^R 为四环素抗性基因结构要保持完整，用EcoRI酶切后再用连接酶连接的三种产物只有载体-载体连接物基因结构保持完整．
（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是启动子，其合成的产物是RNA，此过程称为转录，原料是核糖核苷酸．
（4）防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，需要有两种限制酶，而amp^R为青霉素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点，结构不能被破坏，故选择EcoRⅠ和BamHⅠ这两种限制酶．
故答案为：
（1）目的基因-载体连接物      载体-载体连接物      目的基因-目的基因连接物      分离纯化  
（2）载体-载体连接物  
（3）启动子              RNA            转录           核糖核苷酸
（4）EcoRⅠ和BamHⅠ