PCR引物是什么?

我不是生物系的,现在要做细菌纯化和鉴定,PCR引物具体是什么东西啊?是固定的还是变化的谢谢!谢谢大家!那我如果送到测序公司去测,我自己要做什么准备啊?谢谢大家的答案!... 我不是生物系的,现在要做细菌纯化和鉴定,PCR引物具体是什么东西啊?是固定的还是变化的
谢谢!
谢谢大家!
那我如果送到测序公司去测,我自己要做什么准备啊?
谢谢大家的答案!
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情感生活谈
高粉答主

2019-06-25 · 醉心答题,欢迎关注
知道小有建树答主
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聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方。PCR又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。

扩展资料:

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:

模板DNA的变性

模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;

模板DNA与引 物的退火(复性)

模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

引物的延伸

DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需 2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

参考资料来源:

百度百科-PCR扩增

研载生物科技(上海)有限公司_
2023-04-12 广告
PCR是一种体外酶促合成特定DNA片段的技术,是根据人类的需要对复杂生命过程的一种简单化的模拟。PCR技术的原理是DNA半保留复制. PCR的成分包括: 待扩增的DNA(模板) 一对寡聚核苷酸引物 耐高温的Taq DNA聚合酶 4种脱氧核苷... 点击进入详情页
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暴走爱生活55
高能答主

2019-05-19 · 我是生活小达人,乐于助人就是我
暴走爱生活55
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PCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,分为两种,引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制,也就是只能识别3'的尾端。

而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上,所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部(就是末尾是3'端的那一边)结合,为那些脱氧核苷酸提供3'的末端,就相当于开了个头。然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链。而那段引物就成了新链的一部分。

扩展资料:

引物设计:

引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与目的基因一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。

在PCR(聚合酶链式反应)技术中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根据这一序列合成引物,利用PCR扩增技术,目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此重复循环,延伸后得到的产物同样可以和引物结合。

PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功,但遵循某些原则,则有助于引物的设计。

引物设计有 3 条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。

具体实现这 3 条基本原则需要考虑到诸多因素,如引物长度(primer length),产物长度(product length),序列 Tm 值 (melting temperature),引物与模板形成双链的内部稳定性(internal stability, 用 ∆G 值反映)。

形成引物二聚体(primer dimer)及发夹结构(duplexformation and hairpin)的能值,在错配位点(false priming site)的引发效率,引物及产物的GC 含量(composition),等等。必要时还需对引物进行修饰,如增加限制性内切酶位点,引进突变等。

参考资料来源:百度百科-引物

参考资料来源:百度百科-寡核苷酸

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白色的妖精
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知道小有建树答主
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通俗的讲,引物就是为了增幅目的DNA而导入的短小DNA片断,在PCR反应中,新合成的DNA是要接在引物上才能继续按照模版DNA复制。引物的设计因需要增幅的序列而不同。举个例子来说,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互补碱基不写了)
那么一般来说,你就要导入以accctc结尾的引物使得增幅继续下去,具体方法和注意事项楼主可以看gee_an大侠的资料。

查了一下测序公司的网页,如果要同定微生物,楼主需要准备如下东东:
1、待测菌体。试管或培养皿都可以,但必须是纯粹的待测菌体,不能含有其他的微生物。
2、提纯的DNA。如果1有致病性或传染性,那么楼主就得自己提纯DNA再交给测序公司。DNA纯度要求可以做PCR。

PS:很佩服楼主充足的经费,我们这里同定一次要2800人民币……
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百度网友334c2ee73
2008-03-21
知道答主
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PCR的目的是大量扩增你所需要的片断。换句话说,就是用人工的方法大量复制DNA。而DNA的复制是以一条链为模板,新合成链按照碱基互补配对进行的。可是有一个问题,DNA的合成必须是前端有一小段序列,他接着这段序列合成,而不能从无到有,凭空合成。它前面这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp.需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物
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好胃口常开
高粉答主

2020-05-01 · 说的都是干货,快来关注
知道答主
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