Question

pcr体系问题

1. pcr体系的问题, 我真的不知道要怎么换算这些单位,例如: 50μl反应体系，上下游引物各10pmol，dNTP 5μl（2.5mmol·L-1 each）,10×PCR反应缓冲液 5μl(Mg2+15 mmol·L-1),Taq酶 1U，模板DNA适量（约100ng）灭菌超纯水补足体积。>>>请问具体在50μl中,我每个组分到底要加多少μl?? 每个成分的浓度怎么算?

2. 如果要加dmso到10%, 那在50μl中是加多少? 相应的体系中哪个组份的量要减少呢?一般加了dmso后, 退火温度要改变吗? 我是打算加dmso后再跑一次梯度,温度范围要换吗? 麻烦大家帮帮我,也许这些东西很基础但我真的搞不懂阿我好想哭阿~~~~~~拜托拜托了~ ~

Answer 1

洁思隆新材料（苏州）有限公司是一家专注于PCR材料再生和科研的公司，为创造更加安全、舒适、纯净，便捷的人类生活提供全新的材料解决方案的新材料企业。推动人类生活环境的持续改善，创造美好生活。

洁思隆新材料(苏州)有限公司座落在有着“上有天堂，下有苏杭”之称的苏州，它也是一座园林城市。一座有底蕴的美丽城市，一家有责任的新兴公司。我们会在这花园的城市里，萃取自己的产品，不忘初心，为青山绿水，贡献自己的一点力量!

洁思隆新材料（苏州）有限公司，已深耕塑料行业多年。近年来随着经济的发展，环境的污染成为社会的主要议题，洁思隆新材料（苏州）有限公司认为一个有社会责任感的公司要为社会碳中和贡献自己一点力量。为此公司决定致力于塑料的循环利用，再生料的溯源，化学品的使用，环境的保护，社会责任的提升，洁塑隆一直在行动。

Answer 2

引物稀释到10μM，也就是合成过来的干粉加上它NM数值x的100倍，然后50μl里上下游引物各加1μl；10×PCR反应缓冲液 5μl，Taq酶1μl（一般说明书上有他的活性浓度，也就是多少U/μl），然后是模板体积(20-200ng，根据你模板的浓度确定体积)，50μl扣去上面这些就是水的体积。
如果加DMSO，10%那就应该加5μl，水就少加；退火温度普遍降低5度左右。