Question

跪求真菌菌丝体全蛋白提取方法

Answer 1

一、 材料与试剂准备:
1.鲜菌丝体或冷冻菌丝体样本
2.蛋白提取缓冲液（通常包括：Tris-HCl、NaCl、EDTA、Triton X-100、PMSF等，具体成分可根据目标蛋白的特性进行调整）
3.液氮
4.清洁的研磨器或研磨珠
二、操作步骤:
1.收集鲜菌丝体，用清水清洗，去除多余的培养基和杂质，然后用滤纸吸去多余的水分。
2.如果是鲜菌丝体，可以将其冷冻至-80°C并存储，或者立即进行下一步。冷冻可以帮助破碎菌丝体。
3.在液氮中使用研磨器将菌丝体研磨成粉末。
4.将研磨好的菌丝体粉末转移到离心管中，加入适量的蛋白提取缓冲液。
5.于4°C下振荡混合约30分钟，充分释放蛋白。
6.于4°C下高速离心10-15分钟。
7.收集上清液，该液中包含提取的蛋白。
8.使用蛋白浓度测定方法（例如Bradford法）测定蛋白浓度。
三、注意事项:
1.蛋白提取过程中要尽量在低温环境下操作，以防蛋白降解。
2.根据需要，可以在蛋白提取缓冲液中添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂。

Answer 2

我用的方法是液氮冷冻研磨法，效果很好。你可以试试。
是有这种试剂盒买的。你可以自己查查真菌蛋白质提取试剂盒 之类的。
有篇文献（双孢蘑菇耐温差异蛋白质组学研究 2009），其中介绍了用酚抽提法提取双孢蘑菇菌丝胞内总蛋白的方法，用于双向电泳。你可以参考一下~

追问

能否详细说一下您的液氮冷冻研磨法？我是要提取真菌蛋白做诱导子。O(∩_∩)O谢谢

追答

就是先碾钵预冷，然后碾钵中加入液氮，加入菌丝，磨就行了，磨下来粉就加入到裂解液中。然后就是基本的蛋白质提取步骤啦。