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液相色谱保留时间漂移是什么原因造成的？求答案

Answer 1

1、色谱柱平衡

如果观察到高效液相色谱保留时间漂移应首先考虑色谱柱的平衡，在每次运行前给足够的时间来平衡列平衡通常需要10~20柱的流动相，但如果在流动相中加入少量的添加剂(如离子对试剂)，则需要很长时间才能平衡流动相污染；

也可能是原因之一在流动阶段溶解的少量污染物可能会在柱上慢慢累积，造成滞留时间的漂移。需要注意的是，水是一种容易被污染的流动相成分。

2、固定相稳定性

即使在推荐的pH范围内使用，固定相的稳定性也受到限制。

例如，当所述二氧化硅基片是优选pH4的水解稳定性和流动相的水解速率和相关配体的类型。双官能和三官能配位体配体是比接合的单官能配体更稳定;短链键合的长链键合相比较稳定;相比要稳定得多烷基键合氰基键合相。

色谱柱的频繁清洗也加速了色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相也可以在水溶液中水解，例如氨基键合相。

3、色谱柱污染

另一个造成滞留时间漂移的常见原因是柱污染。

高效液相色谱(HPLC)是一种非常有效的吸附过滤器它可以过滤和吸附流动相携带的任何物质污染源可为流动相本身、流动增容剂、连接管、泵、采样器及仪表垫片、样品等。

它通常可以测定污染的实验源。如果样品被保持在有较强的成分的柱，它可能是潜在来源的保留时间偏移。这些根通常是样品基质，如：药物赋形剂，生物样品（例如血清）蛋白和化合物的脂质，淀粉食品样品，环境水的样品，如腐殖酸。

通常，样品中的强保留组分具有高分子量。在这种情况下，保持时间漂移将随着背压的增加而增加。采用固相萃取（SPE）和其他样品前处理方法，可以去除样品基质。避免柱污染的最简单的方法是防止它相比之下要找出问题所在并设计有效的清洁步骤来去除污染物则困难得多。

强溶剂通常在给定的色谱条件下使用，但不是所有污染物都能在流动相溶解。例如，THF可以去除反色谱柱中的许多污染物，但蛋白质不能溶解在THF中。二甲基亚砜通常用于从反相色谱柱中去除蛋白质使用保护柱是一种非常有效的方法。反冲柱只是最后的手段。

4、流动相组成

流动相组成变化缓慢也是造成停留时间漂移的一个共同原因。如果流动相中的挥发性组分等于流动相中的挥发性组分，则应防止蒸发、反应等引起的流动相变化。

保留时间重现性好或坏的表现液相的重要指标，同样的事情两次不超过15秒以上的保留时间差，可以被看作是超过半分钟保留时间偏移，则不能定性。

Answer 2

保留时间漂移的故障排除
保留时间不重现有两种不同的情况：既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下：一色谱柱平衡如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。
流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。二固定相稳定性
固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。
经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。三色谱柱污染保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。
HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。
样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。
避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。
DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。
使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。四流动相组成流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。五疏水坍塌当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱（如
Waters SymmetryShield RP
色谱柱）或非端基封口的色谱柱（如
色谱柱）也可避免发生坍塌。