消除血浆蛋白干扰的方法有哪些?各有什么特点?
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(1)盐析法,此方法并未破坏蛋白质天然状态,沉淀出的蛋白质可不变性,所以盐析法是分离制备蛋白质或蛋白类生物制剂的常用方法。
(2)有机溶剂沉淀法,通过破坏蛋白质的水化膜而使蛋白质沉淀,此方法在常温下可使蛋白质变性,低温下可使变性速度减慢。
(3)重金属盐沉淀法,可与蛋白质结合形成不溶于水的蛋白质盐沉淀,引起蛋白质变性。临床用于救重金属盐中毒。
扩展资料:
溶剂沉淀法:上清液弱碱性。
中性盐析法:上清液近中性,但中性盐易污染柱。
强酸沉淀法:上清液酸性,可用HPLC不能直接用LC-MS。
热凝固法:只能去除热变性蛋白。
最初用盐析法只是将血浆蛋白分为白蛋白和球蛋白,后来用分段盐析法可细分为白蛋白、拟球蛋白、优球蛋白和纤维蛋白等组分。用醋酸纤维薄膜电泳法可分为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等5条区带,而用分辨力较高的聚丙烯酰胺凝脉电泳法则可分为34条区带。
参考资料来源:百度百科-血浆蛋白
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溶剂沉淀法,上清液弱碱性
中性盐析法,上清液近中性,但中性盐易污染柱
强酸沉淀法,上清液酸性,可用HPLC不能直接用LC-MS
热凝固法,只能去除热变性蛋白
中性盐析法,上清液近中性,但中性盐易污染柱
强酸沉淀法,上清液酸性,可用HPLC不能直接用LC-MS
热凝固法,只能去除热变性蛋白
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消除血浆蛋白干扰的方法主要包括蛋白质沉淀、固相萃取和免疫亲和清除等。这些方法各有特点,主要体现在操作过程、效率、成本以及适用的样品类型等方面。
1、蛋白质沉淀
这是一种常用的方法,通过添加有机溶剂、酸或其它特定的沉淀剂来沉淀血浆中的蛋白。特点包括操作简便、快速,无需特殊设备。但是,它可能会沉淀部分小分子化合物,并且不够特异性,无法完全消除所有蛋白质。
2、固相萃取
这种方法利用固相介质来吸附目标分子,从而从复杂的生物样品中分离出所需的组分。其特点是具有较高的选择性和灵敏度,可以用于复杂样品的净化。然而,该方法操作步骤多,且成本较高。
3、免疫亲和清除
通过特异性抗体来识别并清除特定的蛋白。这种方法特异性强,可以高效清除特定蛋白,对其他小分子物质的影响较小。缺点是需要高质量的抗体,且成本较高,不适用于批量样品处理。
1、蛋白质沉淀
这是一种常用的方法,通过添加有机溶剂、酸或其它特定的沉淀剂来沉淀血浆中的蛋白。特点包括操作简便、快速,无需特殊设备。但是,它可能会沉淀部分小分子化合物,并且不够特异性,无法完全消除所有蛋白质。
2、固相萃取
这种方法利用固相介质来吸附目标分子,从而从复杂的生物样品中分离出所需的组分。其特点是具有较高的选择性和灵敏度,可以用于复杂样品的净化。然而,该方法操作步骤多,且成本较高。
3、免疫亲和清除
通过特异性抗体来识别并清除特定的蛋白。这种方法特异性强,可以高效清除特定蛋白,对其他小分子物质的影响较小。缺点是需要高质量的抗体,且成本较高,不适用于批量样品处理。
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