Question

高中生物基因工程的问题

1.限制酶既然取自于原核生物，比如说取自于大肠杆菌的Ecor1限制酶，为什么不切割自身的质粒呢？如果说识别序列不同的话，那用Ecor1限制酶切的目的基因，就不能再以大肠杆菌作为受体了吗？
2.天然质粒不能直接作为载体，需要人工改造，有什么需要改造的？

Answer 1

你这个基因工程学的挺深的，如果不是必要的考试内容，建议不要这么深究，你可能会很累。
简单给你说说你的问题吧。
限制性内切酶在细菌中的作用，类似于细菌的免疫系统，是为了切断外源物基因的，是一种排它机制，进化筛选决定了此种酶的切割位点，在自身的质粒中不存在（其实也不完全是不存在），也就不切割自身的质粒了。
你的第二个问题，概念混淆的太多，好好缕清一下思路，想想你的目的基因是用来做什么的，你说的ECOR1切割目的基因是为了什么，你所谓的受体菌，又是做什么用的。如果你只是这一个点不明确，那简单说就是，酶切位点的切割和目的基因的重连，破坏了原有酶切位点，原酶自然失效。
第三个问题，天然质粒能不能做载体，其实就是天然质粒和载体的区别，你想想细菌质粒的功能，比如一些毒力基因、这对载体是无用的，即去除，再比如缺少适当的多克隆位点，这对插入重组不利，再比如缺少针对性筛选标记，这又对转化菌株的筛选不利了，如果是表达载体，还缺少相应的操纵子，这对基因的表达的必须的。

追问

第二个问题，为很么会破坏原有酶的切位点呢？不过是加了目的基因，还是有原来的识别序列啊！
还有一个问题，农杆菌转化法需要植物组织培养脱分化再分化吗？

追答

序列、连入目的基因后，可能是原来的序列，也可能不是原来的序列，是不是你学的只有一种6个配对的回文结构呀？这个切割序列的样式有很多，有6个的、8个的、4个的、各种各样的，切完了剩4个碱基的粘性末端的，也有剩3个的。。。，所以连上了目的基因原酶未必可以识别，这可能是酶的特性，也可能是我们设计的特性。
而且、大肠杆菌分很多种，不是每一种都有那么多限制酶的，菌种也是培养了很多年，改造了很多代，然后很适合做宿主的。

Answer 2

1、在一个活细胞内，限制酶是被一层特殊的生物膜包裹着的，所以限制酶不会切割自身的质粒，就像人体细胞的溶酶体中有很多溶解酶，可以将外来的东西分解掉，但他就是不会分解人体自身的细胞组织。再比如说警察用枪可以打死人，但他不打自己的好人。
2.天然质粒不能直接作为载体，需要人工改造，有什么需要改造的？

天然质粒分子量小，有许多酶切位点，但有时候需要他的分子量更小，或者需要他没有的酶切位点，这时就要改造。改造方法：增减分子量，增或减酶切位点的种类或个数，改变质粒的自身性质，如非极性，以便更容易穿过细胞膜。

Answer 3

1、限制酶用于切割外源性的DNA, 尤其是病毒DNA。在细菌里面，细菌自己的DNA被自身的酶甲基化了，不会被限制性内切酶所识别，而外源性DNA没有经过甲基化的处理, 会被切除。
2、改造的目的是要质粒含有需要的切割位点和相应的标记基因，还需要考虑复制原点、启动子和终止子的构建。

追问

那如果用显微注射技术将目的基因导入大肠杆菌，大肠杆菌会不会切割目的基因呢