Question

某细胞可组成性地分泌一种蛋白质，已经知道了它的N端部分氨基酸序列，如何将该蛋白质的基因克隆和表达?

Answer 1

【答案】：(1)按照遗传密码预测相应于N端氨基酸序列的mRNA核苷酸序列；(2)用快速固相化学合成法合成一系列短的DNA片段，15～20核苷酸长，它们能和mRNA的部分序列形成互补碱基对；(3)提取细胞总mRNA；(4)将合成的短的DNA片段与细胞总的mRNA杂交，可分离出所需要的mRNA；(5)将此mRNA进行体外翻译以验证是否为目的基因；(5)将该mRNA进行反转录获得cDNA；(6)将此cDNA连接到一表达载体上；(7)将此表达载体在适当的细胞中表达。