Question

简述哺乳动物核移植的基本技术路线。

Answer 1

【答案】：选择受体细胞：可选择受精卵和MⅡ期卵母细胞，它们的细胞质具有重编程能力，可使处于不同分化程度的供核细胞的核去分化并恢复到全能性状态。
选择供核细胞：胚胎细胞、未分化的原始生殖细胞、胚胎干细胞、胎儿体细胞、成体细胞甚至是高度分化的神经元、淋巴细胞等均可作为供核细胞的来源。
受体细胞去核：主要方法有紫外线照射去核、盲吸法去核、蔗糖高渗处理去核法、透明带打孔去核法、超速离心法。
重构胚的组建：有两种方法组建重构胚，一种是采用显微操作的方法，直接将供核细胞移植到去核受体细胞(MⅡ期卵母细胞或受精卵)的透明带下，再通过细胞融合(电融合或仙台病毒介导)的方法，使供核细胞与受体细胞发生融合，实现细胞核与细胞质的重组。另一种做法是以显微针反复抽吸，分离出供体细胞核，然后将供体细胞核直接注入已去核的受体细胞，直接构成重组胚，这种方法主要被用于克隆小鼠的制作。
重构胚的激活：正常受精过程中，会发生一系列的精子激活卵母细胞的事件。因此，在重构胚组合成功后，也必须要模拟体内的自然受精过程，对重构胚进行激活。激活通常采用化学激活与电激活方法。
重构胚的培养与移植：重构胚激活后，需经一定时间的体外培养，或放入中间受体动物（家兔、山羊等）的输卵管内孵育培养数日，待获得发育的重构胚（囊胚或桑椹胚）后，方可将其移植至受体的子宫里。