Question

分离mRNA过程中,如果RNA有DNA污染会有影响吗

Answer 1

会有影响。因为提取的RNA有DNA污染，那么反转录以后的cDNA也就有基因组DNA污染，这样，扩增cDNA。都会出现杂带或非特异性扩增，对实验结果不好。

由一个DNA分子，边解旋，边转录。利用细胞核内部的游离核糖核苷酸合成。合成规则遵循碱基互补配对原则。以上过程叫做转录，在细胞核中完成。

接着，mRNA穿过核孔。和细胞质中的核糖体结合。选择tRNA运输氨基酸，和对应的三个碱基排列好。再与其它的氨基酸通过肽键连接在一起，形成肽链。

扩展资料

RNA分子有三大类：信使RNA（mRNA），核糖体 RNA（rRNA）。

信使RNA的功能：把DNA模板链上的碱基序列转录为RNA分子上的碱基序列（mRNA），再从mRNA上的碱基序列通过合成蛋白质的机构获得氨基酸序列。

核糖体RNA功能：把翻译系统中各种组分聚集在一起，形成正确的空间排布及高级结构，以完成将遗传信息从mRNA到多肽链的转变。

Answer 2

有的.
你提取的RNA有DNA污染,那么反转录以后的cDNA也就有基因组DNA污染,这样,你扩增cDNA或者做qPCR,都会出现杂带或非特异性扩增,对实验结果不好.
所以一般吸取RNA上清液的时候,宁可浪费点RNA也不要混杂有下层的DNA.

Answer 3

有的。
你提取的RNA有DNA污染，那么反转录以后的cDNA也就有基因组DNA污染，这样，你扩增cDNA或者做qPCR，都会出现杂带或非特异性扩增，对实验结果不好。
所以一般吸取RNA上清液的时候，宁可浪费点RNA也不要混杂有下层的DNA。

追问

谢谢你的回答，不过我用oligoT 先把mRNA分离出来在做反转，理论上说DNA应该会去除掉的吧

追答

oligoT是用来逆转录的，和mRNA没有什么关系吧……（可能是我孤陋寡闻，不太了解）
在逆转录的过程中，如果之前提的RNA中有DNA污染，是不会被去除的，会混在cDNA中。

Answer 4

这要看你的实验要求。一般都会去除DNA污染。
我们都是用promega的RQ1（无RNase 活性的DNA 酶）处理。

Answer 5

如果RNA中有DNA污染一定会对实验有一定的影响的。
1. 如果你扩增的基因有内含子，那么跨内含子设计引物可能不会有非特异扩增。但是如果DNA残留多的话会对PCR酶产生影响，扩增效率有收到抑制。
2. 如果你的基因没有内含子，那么有DNA扩增就会增强扩增信号（Real-Time信号会虚高，普通RT-PCR条带会比实际的亮），干扰到最终的分析结果。
3. 如果你的基因本身有内含子，而你没有特别设计引物，DNA残留稍微多一点那么你有可能会在Real-Time结果分析中看到溶解曲线有杂峰，或者在RT-PCR中出现非特异带。
建议你使用DNaseI处理步骤的试剂盒提取RNA，比如RNAprep系列（TIANGEN）的试剂盒或者使用TIANGEN的去基因组RT试剂盒FastQuant RT Kit(With gDNase），去基因组和RT总共只需要十几分钟。即使有非常严重的DNA污染都能去除的很干净，不会影响实验，而且价格和普通的RT试剂盒几乎一样很划算也很方便，你可以试试。