Question

gst标签蛋白的纯化步骤？

Answer 1

GST标签融合蛋白是检测蛋白质表达、纯化的方法。GST标签（Glutathione S-transferase）是一个小分子和谷胱甘肽转移酶结合的标签，可帮助蛋白质在大肠杆菌中表达和易于纯化。
下面是GST标签蛋白的常规纯化步骤：
一、提取细胞：将经过重组后表达含有GST标签的目的蛋白的大肠杆菌进行培养，利用超声波破碎等方法将其破碎提取出蛋白。
二、亲和层析：利用谷胱甘肽琼脂糖glutathione agarose等树脂与GST标签特异性地结合，纯化GST标签蛋白。在洗涤缓冲液中添加洗涤剂和盐可以去除非特异性吸附的其他蛋白。
三、切割和洗脱：针对某些需要在不影响目的蛋白活性的情况下去除GST标签的需求，可以加入酶，如thrombin，截断GST标签和目的蛋白之间的链接。之后在洗脱缓冲液中加入还原剂，如L-谷氨酸可将目的蛋白从树脂上洗脱。
四、浓缩、去除杂质：使用浓缩器将纯化的GST标签融合蛋白进行浓缩。通过尺寸排除柱除去杂质，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中未被识别的其他蛋白等。
GST标签蛋白的纯化步骤主要包括提取目的蛋白、亲和层析、切割和洗脱、浓缩和去除杂质等步骤，这些步骤的具体方案需要根据蛋白的特性和实验需求进行优化和调整。