Question

RAW264.7细胞转染详细点的注意事项及操作步骤

要是有有关培养方面的就更好了

Answer 1

1.细胞接种：一般做转染前一天接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%。
2.为了能在使用时有较好的转染效果，第一次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试剂即可。将最佳转染条件（siRNA与转染试剂的用量、比例）放大到对应的孔板即可。
3.设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度最好做2-3个复孔（至少2个复孔，避免实验误差）。
4.用来稀释siRNA和Rfect的培养基必须是无血清培养基，因为血清的存在会干扰siRNA与转染试剂的混合，并且影响转染效率。
5.检测方法：转染后48h收细胞做qPCR基因水平检测或者转染后72h收细胞提蛋白做western Blotting蛋白水平检测。