Question

高效液相色谱法分离某物质得到的色谱图两个峰值相同，是什么原因？应该采用哪些具体措施改善其分离呢？

Answer 1

从简单到复杂，可行性从高到低的方法如下
1：换方法，通过检索相关文献找到更合适的分析方法。

2：换柱子，更换性能更好的色谱柱以改善分离度【旧柱子换成新柱子，短柱子换成长柱子，用高效分离柱（粒径更小，孔径更细的柱子）或者根据两个化合物的性质换特殊柱子（例如换含碳量更高或更低的柱子或者换经过特殊处理的柱子）】
3：将等度洗脱改成梯度洗脱

4：改变柱温（这个需要自己摸索一下）

5：改变流动相中各组分的比例，例如
5.1：改变流动相的PH值（分离酸性物质则调低流动相的PH值，分离碱性物质则调高PH值）
5.2：改变各流动相组分或比例，例如将反相色谱中的甲醇换为已经，或者增加水相的比例.
5.3：改变流动相的缓冲体系或改变流动相缓冲盐的离子浓度。（例如醋酸盐改磷酸盐。分离极性较大的物质则增大缓冲体系的离子浓度等）

以上各方法并不是每个都管用。当然最管用的还是方法1-3，方法4和方法5一般不常用。因为需要摸索，很麻烦。实在没办法或者为了省钱或者自己有兴趣，可以摸索一下。
这是我做HPLC多年的经验总结啊，采纳吧。

忘了说原因了：
1：这两个物质的性质非常相似，导致很难分离
2：你的系统（包含色谱柱和方法）并不适合分离这两个物质。

Answer 2

从图上看，你这两个物质显然没有被分开。不过，能分成这样，以我看，这两个物质通过色谱条件的调整还是完全有希望分开的。如果你是用短柱子，建议用长柱试试看，如果柱子已经是25cm或者30cm的了，改变一下流动性比例，应该是可以分开的。另外，建议你可以参照一个叫drylab的色谱优化软件优化你的色谱条件

Answer 3

先看看峰宽，出峰很快的峰宽一定会很窄，反之最有可能的是你的柱子坏了或者填料不合适。
确定柱子没问题的话，可能是两个物质没分开（峰高相同的两物质没分开有点巧合了。。可能性不大），可以调整有机相和水相的比例。
还是不行的话再尝试更换水相的盐种类或者PH ，但是一般用到的可能性不大，PH主要是用于解决多组分分离度的问题。