Question

细胞培养液中蛋白用ELISA怎么检测

Answer 1

是细胞分泌的蛋白的话，直接在培养皿中铺入一定量的细胞，培养3天，细胞达到80-90%时，加药的时候换无血清培养基，作用完后收集细胞培养上清液，3000rpm,4℃ 离心10min，取上清液。ELISA检测时，不同因子的稀释度，要事先做个预实验确定。对照组为新鲜培养液。

Answer 2

一般来说检测细胞内的蛋白质需要破碎细胞，非结构蛋白较易提取，破碎细胞后离心取上清即可。而结构性蛋白则需破碎脂膜提取蛋白，具体方法可参照膜蛋白提取的相关文献。提取的总蛋白需定量，然后以每mg或g的蛋白的相同浓度稀释后用于测定。提取时注意要保持低温及加入必要蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)。

Answer 3

　　是细胞分泌的蛋白的话，直接在培养皿中铺入一定量的细胞，培养3天，细胞达到80-90%时，收取细胞培养上清液，离心去除沉淀，取上清测定浓度，用于ELISA检测。对照组为新鲜培养液。