Question

用天根的试剂盒（离心柱法）提DNA，两个样本结果怎么样？是不是有很大问题？

用天根的试剂盒（离心柱法）提DNA，两个样本结果分别为OD260/280=1.69，浓度97ug/ml；OD260/280=1.7，浓度25ug/ml。希望有高人指点~

Answer 1

基因组DNA的260/280的值一般在1.6-1.8之间。（虽然和洗脱液有关，但一般都偏低）
就是浓度低了点，不过这个和样品、裂解是否充分等等有关。样品应该没问题，继续用。

追问

我今天又提了几个，浓度还是很低，基本都在40ng/ml，请问怎么补救？

追答

可能是裂解不够充分。（组织的话，研磨和破碎一定要充分，细胞的话煮一下也是可以的）
但是即使是这么低的浓度，还是能用的吧。

追问

我做的事人血，也可以煮一下吗？多少度煮啊？煮多久？
我今天去了500ul血，裂解大约十分钟，需要再久一点吗？

追答

哦，血液的话不是这样的，不用煮。
列举几个步骤你自己看一下：
1.没有充分裂解：DNA和蛋白质，没有通过涡旋振荡充分解离开，然后，离心取上清的时候，没有解离的DNA随着蛋白质沉淀一起被沉淀丢失，就会导致DNA产量低。（不知道天根的试剂盒有没有涡旋这一步，但是原理是一样的）
2.起始DNA含量是否因为血液保存反复冻融本身就低；或者血液样本来自使用免疫抑制剂的病人，血液中淋巴细胞少，提取的DNA浓度也会低些。
40ng/ml？还是40ng/ul？如果是后者，继续往下做pcr什么的这点浓度也够了。

追问

哦，是40ug/ml
没有我选这一步，明天试试找个涡旋振荡的仪器
是肿瘤患者的血液，应用化疗可能会引起白细胞减低，可能也有这个原因吧
如果我要做多个位点的PCR，这个量也够吗？大约10个位点

追答

pcr的话，pg级的就可以检测出来了，这个量也够了。

Answer 2

你用的是小提试剂盒是吧，纯度还行，因为OD比值在1.6-2.0之间都行，1.8最好。不过浓度比较低，尤其是第二个，才25。一般我用柱子小提质粒，浓度都能在100以上。如果你是提基因组DNA的话那另说了。

追问

是基因组DNA 啊~怎么个另说法啊？

追答

哦，基因组的我没提过。刚才问了一下别人，说基因组要到几百才是正常，看样子你提的浓度低了。可能是裂解的时候有问题吧