Question

PGEX系列表达载体的特点

我在用其他载体做表达的时候出现了一点问题，有人建议我用pegx系列的载体试一试，请问一下PGEX 系列表达载体有什么特点，谢谢！
在原核中表达，我设了5个iptg浓度，以及4个时间梯度，都没有成功表达，所以想用另外的载体分析一下。谢谢啦

Answer 1

pgex特点就是带有GST标签，可以增加目的蛋白的溶解度，别的没什么特点，属于大众型载体，目前也较常使用。你说的没有表达有没有做全菌的sds-page啊，不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带，至于形不形成包涵体就取决于你的iptg浓度和诱导温度了，iptg越低，温度越低可溶性越好，我们曾做过0.1的iptg，4度诱导过夜的。因为pgex载体是不能变性复性的，因为GST标签的活性会发生改变。如果是全菌都没有表达，首先检查是不是你插入序列的问题，排出后看看是不是稀有密码子的问题，真核基因在原核细胞中表达会受到大肠杆菌稀有密码子的影响，网上有分析软件。如果稀有密码子比较多可以使用rosetta菌株来表达，应该能出来的，只要不是你序列的问题，没有出不来的蛋白，只是溶不溶，有没有活性的问题。

Answer 2

原核表达？ 是表达不出来还是全在包涵体里面？
说详细一点。

没有成功表达是没有表达还是全在包涵体里上清没有？
iptg浓度不重要，时间也不重要。