抗性基因在质粒上，怎样起筛选作用
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抗性基因在质粒上，怎样起筛选作用
抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中.
如果你的质粒是已经构建好,而且鉴定正确的,没有空载体质粒,那么,当你转化后,在筛选平板上转化（因为转化不是100%的效率,有些菌是没有质粒转入的）,只有转入了该质粒的菌才能长起来,也就意味着这菌是带有你的目的基因.另外,抗性基因和标记基因（如营养缺陷基因）给予菌体以选择压力,有利于质粒在菌体内的大量扩增.
另一种情况,比如你做连接实验,把目的基因片段和酶切质粒连接,这时,连接效率更不会是100%,当你把连接产物转入感受态细菌,只要转入了该质粒（无论是空载体还是阳性载体）,菌都能长起来,没转入的就长不起来,起到第一步筛选.要筛选你的阳性克隆,还需进一步检验,比如PCR或者提质粒酶切.
纯属手打,欢迎继续讨论,祝愉快!
抗性基因或标记基因在质粒上是为了检验质粒是否被转入菌体中.
如果你的质粒是已经构建好,而且鉴定正确的,没有空载体质粒,那么,当你转化后,在筛选平板上转化（因为转化不是100%的效率,有些菌是没有质粒转入的）,只有转入了该质粒的菌才能长起来,也就意味着这菌是带有你的目的基因.另外,抗性基因和标记基因（如营养缺陷基因）给予菌体以选择压力,有利于质粒在菌体内的大量扩增.
另一种情况,比如你做连接实验,把目的基因片段和酶切质粒连接,这时,连接效率更不会是100%,当你把连接产物转入感受态细菌,只要转入了该质粒（无论是空载体还是阳性载体）,菌都能长起来,没转入的就长不起来,起到第一步筛选.要筛选你的阳性克隆,还需进一步检验,比如PCR或者提质粒酶切.
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迈杰
2024-11-29 广告
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