高通量测序技术 中的“高通量” 是什么意思

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高通量是相对于第一代测序的,第一代测序只能一次测1个样品的1段序列,产生的数据量相对来说很小,而高通量测序一次能够产生的数据量在几十G上百G,可以一次测很多的样本。

在2000年的时候,3700、MegaBace等仪器上的测序也是高通量测序,是相对手工测序或者跑平板胶来说的。

不过到2005年以后,高通量测序就改指第二代测序(Next generation sequencing),454、Solexa(后改为Illumina)和SOLiD等第二代测序,比3730等第一代测序的通量提高了成千上万倍,甚至上亿倍,所以称为高通量测序。

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原理:

测序方案建立在双脱氧测序法(Sanger等,1977)的基础上。为了从每一克隆插入片段两端成对地进行测序,每一个质粒模板DNA板应配备两个384孔循环测序反应板。测序反应采用Big Dye Terminator chemistry version 3.1(AppliedBiosystems)和标准M13或常用正向引物和反向引物。测序反应通过BiomekFX(Beckman)移液操作工作站建立。

机械臂负责等分模板试样,起与反应液混合的作用,反应液含有双脱氧核苷酸、荧光标记的核苷酸、TaqDNA聚合酶、序列引物和缓冲液。模板和反应板有条形码,且在BiomekFX移液操作工作站上有条形码读取器跟踪,确保模板和反应液转移中没有错误。30~40线性扩增步骤连续循环在MJResearchTetrads或9700热循环仪(Ap—pliedBiosystems)中进行。

参考资料来源:百度百科-基因组高通量测序

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