影响pcr的因素有哪些
影响PCR的因素当中有温度,温度会影响PCR的三个反应阶段,包括了第1个阶段:高温变性,第2个阶段低温负性和第3个阶段:适温延伸都会严格的受到温度的调控。
此外影响PCR的因素还包括了引物的设计效果,引物会直接定位到目的基因的两端并且有增加限制酶识别位点的效果。如果设计的完善,能够迅速的实现目标,而节省了时间和金钱。反之则会浪费时间和金钱。影响反应的第3个因素是4种脱氧核苷酸的用量,如果量没有达到足够多的比例和数量,则会严重的制约PCR的循环反应,导致反应被迫中断。
聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对,这也是“微量证据”的威力之所在。
由1983年美国Mullis首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年,PCR已发展到第三代技术。1976年,台湾科学家钱嘉韵,发现了聚合酶,为PCR技术发展做出了基础性贡献。
临床应用:
1、感染性疾病。
PCR在医学检验学中,最有价值的应用领域,就是对感染性疾病的诊断。理论上,只要样本有一个病原体存在,PCR就可以检测到。PCR对病原体的检测解决了免疫学检测的“窗口期”问题,可判断疾病是否处于隐性或亚临床状态。
2、肿瘤。
癌基因的表达增加和突变,在许多肿瘤早期和良性的阶段就可出现。PCR技术不但能有效的检测基因的突变,而且能准确检测癌基因的表达量,可据此进行肿瘤早期诊断、分型、分期和预后判断。
3、遗传病。
PCR技术首次临床应用,就是从检测镰状细胞和β-地中海贫血的基因突变开始的。基因的突变和缺失均会引起各种珠蛋白的表达不平衡,用FQ-PCR检测各种珠蛋白基因表达差异,是地中海贫血诊断的有效手段。