293T细胞为什么经常用于转染、蛋白质表达?
许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点,可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制,从而提高外源基因的表达水平。293T细胞就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系,它来源于人胚胎肾细胞293HEK。
经改造后在其中插入了T抗原,因此用293T细胞做转染可以获得较高的表达水平。 293T细胞也可以作为普通的哺乳细胞用于筛选稳定表达的细胞系,不过它贴壁性差,容易脱落,不利于筛选。 3T3细胞是小鼠胚胎成纤维细胞系,它具有明显的接触抑制作用,所以易于识别已发生转化的细胞。
293细胞是人肾上皮细胞系,有多种衍生株,比如HEK293,293T/17等,来源都是人胚胎肾细胞,其极少表达细胞外配体所需的内生受体,且比较容易转染,是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。
293T细胞由293细胞通过基因技术派生出的细胞系,是经过腺病毒E1A基因的转染,能表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区。
扩展资料:
293T细胞的转染技术:
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。
一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。
尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
参考资料来源:百度百科-T淋巴细胞
参考资料来源:百度百科-239细胞
参考资料来源:百度百科-转染
2023-07-19 广告
推荐于2017-09-20
293T细胞也可以作为普通的哺乳细胞用于筛选稳定表达的细胞系,不过它贴壁性差,容易脱落,不利于筛选。
3T3细胞是小鼠胚胎成纤维细胞系,它具有明显的接触抑制作用,所以易于识别已发生转化的细胞。
T抗原是后来引入的啊?请问怎么才能知道细胞的这些信息啊?有专业的网站吗?谢谢拉
有专业网站,但这种知识都是零零散散的。多问是一个不错的办法。