Question

镍柱纯化问题，我用的是Tris缓冲体系，含30mM的咪唑，然后洗杂洗脱，但是目的蛋白浓度很小，请打击帮帮忙

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用的新的填料，怎么会有这么多杂带而且目的蛋白浓度很低呢，30mM咪唑缓冲液洗杂蛋白的时候很难回到基线，用的80，,100和160mM咪唑洗的目的蛋白

Answer 1

你提供的信息太少了，各个泳道代表什么？用的预装柱？不同品牌的柱子或beads对His-Tag的亲和能力不同。实验过程是怎样的？咪唑在洗杂时刚加的吗？还是结合蛋白时缓冲液里已经有了？这样的纯化方法，在纯化其他蛋白时效果很好，还是你也不确定？说的再多些，也许能帮你。下次，提问题你可以找个专业的生物论坛问下。另外，希望你改进问问题的方式。Good luck！

Answer 2

我觉得是胶的问题，因为胶没制好，因为marker那里就有一些杂带

Answer 3

是不是缓冲液没有配好？还是柱子用的太久了？有可能有杂质结合到柱上影响洗脱呢……