Question

真核过表达质粒，原核过表达质粒的区别~急求~~

比如我需要过表达人恶性黑色素瘤细胞中的某蛋白，能在大肠杆菌中扩增后，转染到人恶性黑色素瘤细胞中，那么我需要的质粒是真核还是原核？

Answer 1

一、指代不同

1、真核过表达质粒：真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。

2、原核过表达质粒：能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。

二、特性不同

1、真核过表达质粒：该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。

2、原核过表达质粒：启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 

三、载体构建不同

1、真核过表达质粒：，由238个氨基酸组成，分子量约为27Kd。GFPGFP在包括热、极端PH和化学变性剂等苛刻条件下都很稳定，用甲醛固定后会持续发出荧光，但在还原环境下荧光会很快熄灭。

2、原核过表达质粒：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。

参考资料来源：百度百科-原核表达载体

参考资料来源：百度百科-真核细胞表达载体

Answer 2

　　所有的质粒都是在细菌（原核）中构建和扩增的，但要在真核细胞中表达需要真核表达载体，要在原核细胞中表达需要原核表达载体。这两种载体主要的区别是启动子和polyA加尾信号的不同，一个适合在原核细胞中表达，一个适合在真核细胞中表达。
　　你需要哪种质粒取决于你最终需要在哪种细胞中表达目的蛋白，如果你要直接在大肠杆菌中表达目的蛋白，然后用纯化的蛋白去处理黑色素瘤细胞，那你就应该用原核载体；如果你要在大肠杆菌中构建质粒，然后把质粒转染到哺乳细胞中表达目的蛋白，你就应该用真核载体。但无论哪种载体，构建和扩增质粒都是在大肠杆菌中进行的。
　　至于抗性基因，因为所有质粒都要在大肠杆菌中扩增，所以都带有大肠杆菌的某种耐药基因。至于真核耐药基因则不一定，原核表达载体肯定不需要真核耐药基因，真核表达载体则有些有真核耐药基因，有些没有。另外，原核细胞的kana耐药基因和真核细胞的neo耐药基因是同一个基因。

Answer 3

质粒只是小型环状DNA分子，你指的真核、原核具体是什么？

追问

比如我要构建过表达质粒载体，质粒带的抗性有些是原核，有的是真核，不懂。。